问：细胞中PKA的提取一定要用全自动组织匀浆器吗？超声破碎仪可以吗？

答：由于超声时产生的热量容易导致蛋白变性/失活，因此细胞中PKA的抽提不建议使用超声破碎仪制备。使用匀浆方法制备时也要注意保持低温条件，匀浆器和PKA抽提液均要在0-4°C预冷，匀浆的过程在冰浴上进行，4°C离心取上清，抽提物在检测当天制备并保存在冰上。

问：在PCR扩增中尤其是咱们的长片段扩增的产品中，5-3的外切活性会把PCR产物中的什么部分切除掉？

答：Taq酶不会切除PCR产物。Taq酶的5''-3''外切核酸酶活性只能在链延伸过程中降解遇到的双链DNA，例如，Taqman探针结合到DNA链上会被Taq酶切除。

问：普通磁架能否代替分离用磁架？能否离心抗生链霉素蛋白包裹磁珠？

答：分离用磁架是用钴化钕，一种稀少的强地磁材料制成。分离用磁架的磁性足够强，可将抗生链霉素蛋白包裹的顺磁珠都吸附到管壁上。普通磁架只能从样品中吸附一些顺磁珠，故不能代替分离用磁架。离心会使颗粒团化，使mRNA得率低，杂质也会一同沉淀，故不能离心。